I personaggi sono uniti in preghiera all'interno di una sala con il soffitto a volta. E' visibile una sola grande finestra dalla quale entra una luce divina che irradia il locale e, in volo, una colomba bianca, simbolo dello Spirito Santo, che fa il suo ingresso.
Maria si trova al centro, in compagnia di altre due figure femminili, potrebbero essere Maria di Magdala e Maria di Salomè. Quasi tutti i presenti, tranne una donna, hanno lo sguardo rivolto verso. Tiziano lascia dominare il colore giallo seguito dal rosso di alcune tuniche. Gli apostoli sono disorientati, sorpresi, alcuni sconvolti. Ciascuno reagisce in maniera personale all'evento che si sta verificando. Chi tende le braccia verso l'alto, chi reagisce in maniera più controllata, chi si inginocchia come Pietro che ci da le spalle